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人結(jié)腸癌細(xì)胞株試驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明

原載自:m.85t3.com[技術(shù)資料頻道]  2018-09-26  瀏覽次數(shù):1675

  人結(jié)腸癌細(xì)胞株的復(fù)蘇,遵守慢凍快融的原則。先將水浴鍋調(diào)至37-37.5度,取出凍存的細(xì)胞迅速放入后將細(xì)胞面浸至水面以下不斷搖動(dòng)至融化。在無(wú)菌臺(tái)內(nèi)將*培養(yǎng)基加入50ml的小培養(yǎng)瓶?jī)?nèi),約5ml左右,然后用無(wú)菌吸管從凍存管內(nèi)取出細(xì)胞,置培養(yǎng)并內(nèi)輕輕搖晃,使細(xì)胞均勻后置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
  人結(jié)腸癌細(xì)胞株的原位染色:
  (1)貼壁生長(zhǎng)的對(duì)數(shù)期細(xì)胞鋪在24孔或6孔板中(內(nèi)有潔凈蓋玻片),讓其爬片生長(zhǎng),待長(zhǎng)到50%~80%滿(mǎn)時(shí),凋亡誘導(dǎo)劑處理細(xì)胞。
  (2)將不同時(shí)間點(diǎn)處理的細(xì)胞進(jìn)行免疫熒光染色,染色步驟同上。
  (3)將染色的爬片細(xì)胞放于一張滴有少量甘油(5ml)的載玻片上,熒光顯微鏡或共聚焦激光掃描顯微鏡觀(guān)察TFAR19在細(xì)胞中的定位。
  人結(jié)腸癌細(xì)胞株試驗(yàn)要點(diǎn)及說(shuō)明:
  1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;
  2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為玻璃制造,并經(jīng)過(guò)鉻酸洗液處理;
  3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;
  4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過(guò)大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;
  5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴(lài)氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
  人結(jié)腸癌細(xì)胞株是一種成團(tuán)、貼壁生長(zhǎng)的細(xì)胞,如果狀態(tài)好的情況下,生長(zhǎng)非??欤?xì)胞形態(tài)是不太規(guī)則的三角形.在低濃度時(shí),此細(xì)胞長(zhǎng)梭型(不好描述),高濃度時(shí)長(zhǎng)成一張地毯,后者才是狀態(tài)好的。

 

 

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